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常德微（wēi）生物实验室（shì）里的灭菌法你知道吗？

时（shí）间: 2021-12-09 10:05:32 来源: 湖南贝塔（tǎ）实验室设备有限公司

微生物实验室常用的（de）器（qì）材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处（chù）理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭（miè）菌工作极为重要，直接（jiē）影响着整个实验能否顺利进行。下（xià）面就和贝（bèi）塔的（de）小编一起来看看微生物（wù）实验室（shì）有（yǒu）哪些消毒灭菌的方式吧！

一、消毒灭菌方法

目前，常用的（de）消毒灭（miè）菌方法多采用物理方法(如，干（gàn）热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方（fāng）法（fǎ）(消毒剂、抗生素)两大类。

1.干热灭（miè）菌法
  是利用恒温干燥箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀（shā）死细菌和（hé）芽（yá）孢，达到灭（miè）菌目的的一种方法。主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器（qì）皿、金属器（qì）械以及（jí）不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌（jun1）法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细（xì）胞体外培养工作时（shí），常须利用工作台面上（shàng）的酒（jiǔ）精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2.湿热灭菌法
  压力蒸汽湿热灭菌法是目前朂常（cháng）用的一种灭菌（jun1）方法。它利用高压蒸（zhēng）汽以及在蒸汽环境中存在的（de）潜热作用和良好（hǎo）的穿透力，使菌体蛋白质（zhì）凝固变性而使微生物死亡（wáng）。适合于布类工作（zuò）衣、各种器皿（mǐn）、金属（shǔ）器械、胶塞、蒸（zhēng）馏（liú）水、棉塞、纸和某些培养液（yè）的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽（qì）压力一般调整为1.0-1.1 kg/cm2，维持20-30min即可达到灭菌效果。
3.射线灭菌法
  利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种（zhǒng）微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸（suān）及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌（jun1）。灭（miè）菌（jun1）时间为30min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤（fū）有（yǒu）伤害，而且对培养物（wù）及一些试剂等也会（huì）产生不良影响。
4.过滤（lǜ）除菌法
  是将液体或气体通过有微孔的滤膜（mó）过滤，使大于滤膜孔径的细菌等（děng）微生物颗粒阻留，从而达到除（chú）菌的方法。过滤（lǜ）除菌法大多用于遇热（rè）易发生分解、变性而失效的试剂、酶（méi）液、血清、培（péi）养液等。
目前，常用（yòng）微孔滤膜金属（shǔ）滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压（yā）过滤除菌。滤膜孔径应在0.22-0.45μm范围内或用更（gèng）小的（de）细菌（jun1）滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用（yòng），阻（zǔ）制小于滤膜孔径的细菌透过。
5.化学消毒剂消（xiāo）毒法
  用（yòng）于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿（mǐn）等。常用的化学消毒剂包（bāo）括甲醛、高锰酸钾（jiǎ）、70%-75%乙（yǐ）醇、过（guò）氧乙酸、来苏（sū）尔水、0.1%新洁尔灭（miè）、环氧乙（yǐ）烷、碘伏或碘酊等。其中利（lì）用70%-75%乙醇、0.1%-0.2%氯化汞、10%次氯酸钠、饱和漂白粉等进行（háng）实验材料的灭菌;利用甲醛加高锰（měng）酸钾[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加热熏蒸（zhēng）法进行无菌室和培养室的消（xiāo）毒。在使用时（shí）应注意安全，特（tè）别（bié）是用在皮肤或实验材料上的消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到（dào）安全（quán）和灭菌的（de）目的。
6.抗生素抑菌法
  主要用于培养液，是培养过程（chéng）中预防微生物污染的重（chóng）要手（shǒu）段（duàn）以及作为（wéi）微生物污（wū）染不严重时的（de）“急救”措施。常用的抗生素有青霉（méi）素、链霉素和新霉素等。
  二、不同种类物品及培养物的消毒灭菌方法
1.无菌操作室（shì）灭菌
  培养材料进行培养、观察或更换培养液时，必须从各方面防止任何污染物进入（rù）培养液或容器，所以无菌操作室的灭菌是至关重要的。由于无菌操作室的（de）污染来源主（zhǔ）要是空气中的细菌和真菌孢子，因（yīn）此长期停用后的无菌操（cāo）作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是用高锰酸钾+甲醛[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]进行无菌室的灭菌。经常使用的无菌操（cāo）作室，在（zài）每次使用前都应（yīng）进行（háng）地面卫（wèi）生清洁，并用紫外线灯照射30min，进行空气（qì）灭菌。对超净工作台（tái），每次操作前用紫外灯照射30min，然后（hòu）用70%-75%酒精擦拭。
2.培养液灭菌
  培养液在（zài）制备过程中带有各种杂菌，分（fèn）装后应立即（jí）灭菌，或在（zài）24小时内完成灭菌工序。目前常用过滤除菌法除去培养物操作液和培养液中的细菌。或对培养液中耐热组分先进（jìn）行高（gāo）压蒸汽灭菌，然后在无菌室加入经过（guò）过（guò）滤除菌的不耐热溶（róng）液，混匀后分装备用。
  使用（yòng）高压蒸汽灭菌（jun1）器灭菌时，将分装好的培养液放入底部有一定量(淹没加热管（guǎn）)凉水的高压蒸汽灭菌器内，增压至0.35~0.4 kg/cm2时排净灭菌器内冷空气，以便使（shǐ）蒸汽能到达各个消毒部位，保证消毒灭菌彻底。然后继续加压加热，当压力表读数达到1.0~1.1 kg/cm2为121℃，保持15~20min即可。由于消毒灭（miè）菌效果取决于温度（dù）而（ér）不是（shì）压力，所以在一定压力（lì）下保持较长的消毒灭菌时间是必（bì）须的。在121℃的蒸汽（qì）温度（dù）下可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽孢杆菌，因此许多培养液的消毒灭菌（jun1）压力、温度（dù）一般保持（chí）在1.0-1.1 kg/cm2、121℃。
  消（xiāo）毒灭（miè）菌时间与需要消（xiāo）毒灭菌的培（péi）养（yǎng）液量密（mì）切相关，时间不足达不到（dào）灭菌效果，时间（jiān）过长（zhǎng）培养液内的一（yī）些化学物质（zhì）遭到破坏，影响培养液成（chéng）分。消毒灭菌结束后，关闭热源，只（zhī）有当灭菌器内压力降为零时才能打开放气阀，排除剩余蒸汽（qì），取出（chū）培养液。不可在压力较（jiào）高时打开放气阀，引起减压沸腾，使容器中液体溢出（chū）。培养液组成中如含有遇热（rè）易分解的物质，则（zé）需用过滤方法消毒灭（miè）菌。首先对培养液中耐热组分进行高压蒸汽灭菌（jun1）后放置在无菌（jun1）场所，固体培养液在40℃左右琼脂即（jí）将凝结前，加入经过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后冷却备用。
  液体培养液在冷却到室温后再加入过滤除菌溶液（yè）。过滤除菌时，使用孔径为0.22-0.45μm或更小的细菌滤膜。过滤除菌（jun1）可（kě）利用抽滤装置或（huò）注射过滤器进行（háng），所用器皿均应进行高压消毒灭（miè）菌，温度不应超过121℃。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械灭菌
  玻璃器（qì）皿可进行干（gàn）热灭菌或高压蒸汽灭菌，但在蒸（zhēng）汽灭菌后更好及时烘干水分。对不能进行高压蒸汽灭菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在无菌操作台面上晾干的（de）同时，用紫（zǐ）外线重复杀菌。实验室还可以用环氧乙烷灭菌袋（dài）对塑料器皿进行消毒，消毒后的器皿要充分散气2-4小时后才（cái）可使（shǐ）用。无菌操作所用的各种器械，一般采用干热或高压蒸汽灭菌，或用75%酒精（jīng）浸泡，然后在无菌操作台（tái）面上晾（liàng）干的同时再用紫外线（xiàn）重（chóng）复杀菌;在使用期间可多次对其进（jìn）行酒精灯火焰灼烧灭菌。
4.培（péi）养材料的（de）消毒灭菌
  采自动物机（jī）体（tǐ）的实验材料，携带着（zhe）微生物（wù）及杂（zá）质，接种前须进行表面消毒灭菌，对内部已受微生物侵染的材料应予以（yǐ）淘汰。从动物机体采集的某些组织块（kuài），须用消毒剂进行（háng）浸泡处理，进行表面消毒。常用消毒剂有过氧化氢（qīng）(10~12%，浸泡5~15 min)、过氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
  三、灭（miè）菌程序（xù）验证内容
1、撰（zhuàn）写验（yàn）证方案及制定评估标准（zhǔn）。
2、确认灭菌设（shè）备技术资料齐全、安装正确，并能（néng）处于正（zhèng）常运行。
3、确认关键设备控制仪表在规定的参数（shù）范围内能正常运行。
4、采用被灭菌物品或模拟物品进行重复实验确认灭菌效果符合规定。
5、完善（shàn）文件（jiàn）记录，撰写验证报告。
  四、灭菌程序（xù）运行监控
1、关键参数应在验证确定的范围内：温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度、辐（fú）照剂量等。
2、灭菌程序定期验证，时效（xiào）不超过半年。
3、灭（miè）菌设备或程序发生变更重新进行验证。
  五、灭菌保证
1、灭菌效果（guǒ）与灭菌前产品污染程度及污染菌特性有（yǒu）关，把握微生（shēng）物污染水平及污染菌耐受性，注（zhù）意各个环节降低污染程度。
2、灭菌冷（lěng）却阶段防止已灭菌物品再次污染（rǎn）。
3、适用生物指示剂、化学（xué）指示剂等监（jiān）控灭菌结（jié）果
  生物指示（shì）剂
基本要求：
1、菌（jun1）种的耐受性应大于需灭菌产（chǎn）品中所有可能污（wū）染菌的耐受性。
2、菌种应无（wú）致病性。
3、菌株（zhū）应（yīng）稳定，存活期长，易于保存。
4、易（yì）于（yú）培养。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。
常用生物指示剂
1、湿热灭菌：嗜热（rè）脂肪芽孢杆菌（jun1）孢子（ATCC7953等，活孢子数为5×105-5×106个/片（piàn）)
2、干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢（bāo）子（zǐ）（ATCC9372等，活孢（bāo）子数为5×105-5×106个/片)
3、辐射灭菌：短小芽（yá）孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107-5×108个/片)
4、气体灭菌（jun1）：
（1）环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×105-5×106个（gè）/片（piàn）)
  （2）气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢（bāo）子数为1×106-5×106个（gè）/片)

（3）过滤除（chú）菌法：缺陷（xiàn）假（jiǎ）单胞菌（ATCC19146等）。